Johnny Test
A 11 éves fiú egy teljesen átlagos gyerek. Csak akkor nem ha segít a nővéreinek a kísérletezésben. Mindig Johnny a kísérleti ember.Kutyájával Poochie-val mentik meg a világot.

Poochie
Johnny kutyája, aki tud beszélni és mindig segít gazdájának,ha a nővérei kísérleteznek rajta. Nagyon jó barát.

Susan és Mary
13 éves ikrek. Van saját laborjuk, ahol mindig kitalálnak valamit. Igaz, hogy van kísérleti egerük mégis az emberi alany az öccsük.

Apa
Egy tisztaságmániás pali, aki először engedte meg lányainak, hogy bulit tartsanak,de csak akkor, ha a villanyt nem kapcsolják le.

Anya
Egy szerény, aranyos nő,aki szinte mindent megenged gyerekeinek.